引言

军团菌（Legionella）是一类广泛存在于自然水体和人工供水系统中的条件致病菌，其引发的军团病（Legionnaires' disease）和庞蒂亚克热（Pontiac fever）对人类健康构成严重威胁。近年来，随着集中式供水系统、空调冷却塔、温泉设施的普及，水中军团菌污染的公共卫生风险显著增加。因此，建立系统、规范的检测方法对防控军团菌传播至关重要。本文将从检测范围、检测项目、检测方法及仪器等维度，全面阐述水中军团菌检测的技术要点与实施策略。

检测范围

水中军团菌的检测需覆盖可能滋生或传播病原体的关键水体环境，主要包括以下几类：

• 公共供水系统：市政自来水、二次供水储水箱、管道末端水；
• 医疗机构：医院重症监护室、呼吸治疗设备用水、牙科诊疗水系统；
• 工业与民用设施：中央空调冷却塔、加湿器、喷泉、游泳池及温泉设施；
• 特殊环境：船舶压载水、工业循环冷却水、农业灌溉水。

此外，在疫情暴发或高风险场所（如养老院、酒店），需实施应急检测与常态化监测相结合的策略。

检测项目

根据国际标准（如ISO 11731）和国内规范（如GB/T 5750），水中军团菌检测的核心项目包括：

• 常规检测项目：
  • 军团菌属（Legionella spp.）总菌浓度；
  • 嗜肺军团菌（L. pneumophila）血清群1型与非1型；
• 特定菌种检测项目：
  • 其他致病性菌种（如L. longbeachae、L. micdadei）；
  • 浮游态与生物膜态军团菌的分布特征。

检测方法

目前主流的检测方法可分为培养法、分子生物学方法和免疫学方法三大类，其原理与应用特点如下：

1. 培养法

培养法基于选择性培养基分离菌落，是国际公认的“金标准”。操作步骤包括：

• 样本预处理（酸化处理或热处理以消除杂菌干扰）；
• 接种于GVPC琼脂培养基（含甘氨酸、万古霉素、多粘菌素B等抑制剂）；
• 37℃、2.5% CO₂环境下培养7-10天；
• 通过菌落形态、氧化酶试验及血清学鉴定确认结果。

优点：特异性高，可定量分析；局限性：耗时长（≥7天），无法检测不可培养的菌体。

2. 分子生物学检测

聚合酶链式反应（PCR）及实时荧光定量PCR（qPCR）技术通过扩增特定基因片段实现快速检测：

• 靶标基因：mip（巨噬细胞感染增强因子）、16S rRNA基因、dotA基因；
• 检测流程：DNA提取→引物设计→扩增反应→电泳或荧光信号分析；
• 检测下限可达10²-10³ CFU/L，全过程耗时4-6小时。

优点：灵敏度高、快速；局限性：可能受死菌DNA干扰，需结合培养法验证活性。

3. 免疫学检测

基于抗原-抗体反应的侧流免疫层析（LFIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）适用于现场筛查：

• 检测靶标：嗜肺军团菌特异性抗原（如LPS、外膜蛋白）；
• 操作时间：15-30分钟（LFIA）或3-4小时（ELISA）；
• 适用场景：疫情应急响应、设施日常巡检。

优点：操作简便；局限性：交叉反应风险较高，需结合其他方法确认。

检测仪器与设备

检测过程中需使用以下关键仪器：

• 微生物培养设备：恒温培养箱、CO₂培养箱、生物安全柜；
• 分子生物学仪器：实时荧光定量PCR仪、电泳仪、核酸提取仪；
• 免疫分析设备：酶标仪、免疫层析读数仪；
• 辅助设备：膜过滤装置（0.22μm滤膜）、离心机、pH计；
• 快速检测设备：便携式qPCR仪、基于CRISPR技术的现场检测装置。

质量控制与标准限值

为确保检测结果可靠性，需严格执行质量控制措施：

• 阳性对照：使用ATCC标准菌株（如L. pneumophila ATCC 33152）；
• 阴性对照：无菌水或经灭菌处理的基质样本；
• 平行样检测：至少设置3个平行样本以减少操作误差。

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